dtt溶解和保存條件？

DTT是什么試劑？

用20ml 0.01mol/L乙酸鈉溶液（pH5.2）溶解3.09g DTT，過濾去菌后分裝成1ml小份貯存于-20℃。

【注意】DTT或含有DTT不能對(duì)溶液進(jìn)行高壓處理。

保存條件:

-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。

DTT其中一個(gè)用途是作為一基化DNA還原劑和去保護(hù)劑。DNA末端硫原子傾向于在溶液中形成二聚體，尤其是在有氧的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯(lián)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)(如DNA生物傳感器中的固定）效率DNA溶液中加入DTT，反應(yīng)一段時(shí)間后，可以減少DNA的二聚化。

dtt溶解和保存條件？

DTT( 二硫蘇糖醇)是實(shí)驗(yàn)室常用的還原試劑，常用于蛋白質(zhì)保存和蛋白質(zhì)二硫鍵還原。DTT進(jìn)入的特點(diǎn)是容易氧化，穩(wěn)定性差，一般DTT常保存在-20度可長(zhǎng)達(dá)數(shù)年。

DTT它是一種非常強(qiáng)的還原劑，其還原性在很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)（包括二硫鍵）的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性。它的氧化還原電勢(shì)在于pH為7時(shí)為-0.33伏。

DTT特點(diǎn)與DDT的保存

DTT是一種常用的還原劑，具有抗氧化作用，進(jìn)口分裝。DTT與巰基乙醇相比，效果相似，但是DTT刺激性氣味要小得多，毒性要比巰基乙醇低得多。DTT在濃度比較低7倍于巰基乙醇的情況下，兩者的效果相似。DTT價(jià)格略高。DTT一般保存條件：-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。

因?yàn)槿菀妆豢諝庋趸?，DTT穩(wěn)定性差，但在惰性氣體中冷凍或處理可以延長(zhǎng)其使用壽命。由于質(zhì)子化的硫親核性較低，pH值的降低，DTT有效還原也隨之降低Tris(2-carboxyethyl)phosphine HCl(TCEP鹽酸鹽)可以作為低pH值條件下DTT替代品，替代品DTT更為穩(wěn)定。

應(yīng)用：

DTT其中一個(gè)用途是作為一基化DNA還原劑和去保護(hù)劑。DNA末端硫原子傾向于在溶液中形成二聚體，尤其是在有氧的情況下。這種二聚化大大降低了一些偶聯(lián)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)(如DNA生物傳感器中的固定）效率DNA溶液中加入DTT，反應(yīng)一段時(shí)間后，可以減少DNA的二聚化。

DTT它也常用于還原蛋白質(zhì)中的二硫鍵，可以用來防止蛋白質(zhì)中的半胱氨酸之間形成的蛋白質(zhì)分子 分子間內(nèi)或二硫鍵。但DTT蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中包埋的二硫鍵（溶劑無法觸及）通常無法恢復(fù)。這種二硫鍵的恢復(fù)通常需要首先改變蛋白質(zhì)（高溫加熱或添加變性劑，如6M 鹽酸胍、8M 尿素或1\\% SDS)。反之，根據(jù)DTT在存在的情況下，二硫鍵的還原速度不同，可以判斷其包埋程度的深度。

DTT在蛋白純化 以及在保存中的作用

我們知道Cys存在于許多蛋白中-SH它通常作為一個(gè)活躍的中心起作用，或者，兩個(gè)-SH二硫鍵連接，是維持蛋白質(zhì)先進(jìn)結(jié)構(gòu)的重要橋梁。-SH具有很強(qiáng)的還原性，溶液被溶液中的溶解氧或其它氧化物氧化，使蛋白質(zhì)失去活性。因此，在蛋白純化中 保存時(shí)，在溶液中加入一定量DTT，以免蛋白-SH被氧化而失活。但是這里有一個(gè)矛盾，DTT加多少量，使-SH保持還原狀態(tài)，使二硫鍵不還原？除上述功能外，DTT還有哪些方面可以發(fā)揮作用？

我也聽過一位專家說，以摩爾數(shù)為基礎(chǔ)，保護(hù)5-10倍的數(shù)量-SH。如果報(bào)告了蛋白質(zhì)buffer中含有15\\大約%的甘油對(duì)蛋白質(zhì)有很好的穩(wěn)定作用。補(bǔ)充一點(diǎn):如果:dtt蛋白摩爾的比例增加到1:100，DTT二硫鍵可以被破壞，此時(shí)相應(yīng)的濃度一般為10mM左右，這通常用于還原肽圖。

但是有些分子 由于空間位阻的作用，內(nèi)部二硫鍵的還原劑量增加到很大程度，無法破壞。此時(shí)，可能需要與尿素等變性劑結(jié)合，以完全中斷二硫鍵（如內(nèi)含體變性）

DTT只有在離子狀態(tài)下才有效pH7-9.5時(shí)效果強(qiáng)，pH降到3以下幾乎沒有電離，所以可以通過減少來減少pH下來到3DTT現(xiàn)在才知道DTT作用還受到pH的影響。說到尿素變性，如果蛋白質(zhì)中存在分子 即使有高濃度的尿素或鹽酸胍，濃度的尿素或鹽酸胍，也沒有高濃度的二硫鍵DTT還原劑不能完全改變蛋白質(zhì)(打破二硫鍵)